意大利研究者Silvia Rasi等报告，弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的细胞游离DNA(cfDNA)基因型具有以下作用：(1)在检测DLBCL中>15%体细胞等位基因突变的准确率上，与活检组织基因型检测的准确率相当;(2)可以检测出一些活检组织上不存在的基因突变，这可能与一些突变在解剖学位置上远离活检例点有关;(3)这是一种实时的、非侵入性的方式，可以用来追踪治疗耐药基因的产生和演化。(摘要号 127)

在DLBCL的诊断、预后或者治疗目标中，实时基因型检测的需求越来越迫切。由于DLBCL缺乏白血病阶段，肿瘤的基因分型迄今仍依赖于组织活检的诊断分析。cfDNA从肿瘤细胞脱落到血液中进而凋亡，可被作为肿瘤DNA的来源来检测癌基因体细胞突变。血样本对于实时监测突变具有明显的优势，此外，cfDNA代表着整个肿瘤的异质性，所以可以采用非活检部位的肿瘤细胞来检测突变。为了采用血浆cfDNA追踪DLBCL的基因表达谱，这项研究连续入组26例不同Ann Arbor分期(Ⅲ~Ⅳ期，共13例)和不同年龄调整的IPI评分(2~3分，13例)的DLBCL患者(>65岁者15例，男女比例为11:15)，在诊断时、R-CHOP治疗过程中、治疗结束时以及病情进展时收集患者血浆cfDNA。同时从粒细胞提取配对的正常基因组DNA，用于筛选基因多态性。该研究设计的靶向重测序板包括59个基因(207 kb)的编码外显子和剪接位点，这些基因都是成熟B细胞肿瘤中高突变的基因，这个测序集合被特异设计成允许>90%的DLBCL至少存在一个突变。超深度二代测序(NGS)在MiSeq(Illumina)公司进行(覆盖率>2000×，包含>80%的目标序列)，采用SepCap基因库建库策略(NimbleGen)。VarScan2的体细胞功能被用来诱导非同义体细胞突变，同时开发了一个严谨的生物信息学程序用于滤除测序错误。这项研究包含样本组和扩展组，样本组中有17例患者，从其活检组织中提取配对肿瘤DNA用来行超深度NGS建库;扩展组中9例患者，都缺少活检组织。

结果显示：共76例cfDNA样本(26例治疗前，28例治疗期间，18例治疗结束时，4例疾病进展时)接受了评价。治疗前cfDNA基因型揭示了已知的DLBCL相关基因突变(血浆的中位突变数为3168/ml，1.73~6.5×104/ml)，包括MLL2(33%)，TP53(25%)，CREBBP和TNFAIP3(21%)，EZH2、TBL1XR1、PIM1(17%)，B2M、BCL2、CARD11、CCND3、FBXW7和STAT6(13%)。

血浆cfDNA基因型和肿瘤组织基因组DNA结果相比较可以得出cfDNA诊断基因型的准确性。配对血浆cfDNA的基因型可准确检测79%的肿瘤组织突变。大部分在cfDNA中未发现的突变在肿瘤活检组织中低表达(中位等位基因丰度为5.7%，0.8%~54%)。同样，ROC分析结果显示，如果肿瘤组织中>15%的等位基因突变，cfDNA基因型具有最高的灵敏度(92%)。

血浆cfDNA基因型还揭示了其他一些体细胞突变(<2/人，1~6/人)，这些在活检组织中未被检测到，包括一些临床相关的基因突变。纵向分析DLBCL经R-CHOP治疗的血浆样本，结果显示对治疗反应较好的患者在1个疗程后cfDNA的一些突变消失了。而在对R-CHOP抵抗的患者中，cfDNA中常见的DLBCL突变仍存在。此外，对于治疗抵抗的患者，cfDNA出现了新的突变，推测在治疗过程中克隆演化出一些耐药基因。

(编译 刘成成 审校 王亮 吕跃)

中山大学附属肿瘤医院 吕跃教授述评：

细胞游离DNA(cfDNA)的检测正在不断的应用于肿瘤诊断和肿瘤治疗的监测，被称之为液体活检。淋巴瘤的治疗的肿瘤细胞监测一直是个难题，液体活检的发展，有望对解决这一问题提供帮助。