美国哈佛大学医学院刘小乐教授研究团队采用文库筛选方式，对三阴性乳腺癌治疗靶点进行地毯式搜索，构建的CRISPR/Cas9敲除文库MusCK可靶向4500个小鼠基因，这些基因与肿瘤发生发展和免疫调控相关。(Cell. 2021年9月20日在线版 DOI: 10.1016/j.cell.2021.09.006)

三阴性乳腺癌缺乏相应激素受体，常规治疗疗效不理想，免疫疗法成为新的研究方向。2019年FDA批准首个用于治疗三阴性乳腺癌的免疫疗法阿替利珠单抗，疗效也仅限于部分患者，提示仍需寻找其他治疗靶点。肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是一个研究关注点。TAM存在于肿瘤微环境，可促进血管生成和肿瘤生长，扎到影响TAM的信号靶点或有助于寻找新的治疗。

体外实验显示，研究者构建的CRISPR/Cas9敲除文库能很好地敲除相关癌基因，在小鼠三阴性乳腺癌细胞系4T1中引入该文库，将感染了文库的4T1细胞注射到小鼠乳腺脂肪垫内成瘤。

16天后收集肿瘤细胞进行分析，发现缺乏T细胞的小鼠肿瘤体积最大，有小鼠4T1细胞过表达增强免疫活性的卵白蛋白，这些小鼠肿瘤体积最小。比较两类肿瘤中sgRNA敲除情况，研究者发现了一些与4T1细胞侵袭性相关的关键基因，如干扰素γ通路相关基因的敲除，与肿瘤体积缩小有关。

将首次筛选出的79个候选基因构建成文库2.0版本进行二轮筛选，IFNγ信号通路中的E3泛素化连接酶编码基因Cop1成为关注对象，因其在肿瘤体积最小的小鼠内几乎完全被敲除了。

与对照组相比，Cop1敲除的小鼠不仅肿瘤进展减缓，存活期也得到延长。Cop1表达下调可明显减少肿瘤内引诱巨噬细胞的化学物质，导致肿瘤内浸入的巨噬细胞数量明显减少，TC1肿瘤体积也缩小。Cop1敲除后下游底物C/ebpδ的泛素化程度下降，直接导致其表达量激增。C/ebpδ能抑制巨噬细胞相关趋化因子转录，减少巨噬细胞进入肿瘤的可能性。

这些研究发现有望为该领域研究带来更多新的靶点药物，为难治性乳腺癌患者带来新的希望。 (编译 王可)