生物质谱技术平台管理细则
1. 生物质谱平台仪器如下:
●基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 MALDI-TOF/TOF (Bruker Daltonics UltraFlex III)
●液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱仪(micrOTOFQ II LC/MS QTOF)(nanoLC:Dionex;MS:Bruker Daltonics)
2. 本平台在满足本院研究人员需求的同时,也对兄弟院校开放检测。
3. 为保证大型高精度实验仪器的顺利运行,本平台实行专人负责操作、维护及管理。仪器负责人需通过该平台仪器的专业培训并获相关资质方可上机操作。不开放他人上机操作。
4. 本平台实行仪器使用登记制度,记录仪器使用日期、仪器状态、样品名称及使用人。
5. 仪器原则上365天24小时开机,如遇特殊情况,负责人应严格按照仪器开关机程序操作。
6. 仪器负责人应维持质谱仪及周围环境的洁净,定期检查环境的温度和湿度、氮气的压力、泵油的状态、滤网的洁净度、清洗喷雾相关配件、清空废液瓶等。
7. 申请使用
样品送检需提前预约。申请人需认真查看“送样须知”后填写“使用申请单”,注明申请单位及科室以及课题名称等,并附样品来源、浓度及相关信息仅收取成本费。(“使用须知”及“使用申请单”可在预约时找平台负责人领取)。
8. 数据管理
实验结果根据申请人要求可以打印报告、E-mail或者刻录光盘形式发送,本平台只保存实验结果六个月。
联系人:沈靖、田慧芳 联系电话:88196715/6720
地点:科研楼612室
附:
生物质谱技术平台使用须知
1. 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Ultraflex III™ MALDI TOF /TOF)
MALDI-TOF-MS)是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱。适用于混合物及生物大分子的测定。MALDI-TOF-MS具有灵敏度高、准确度高及分辨率高等特点,为生命科学等领域提供了一种强有力的分析测试手段。该平台是新一代标准模块化飞行时间质谱仪,具有smartbeam™激光技术,配有MALDI离子源、线性和反射操作模式、源后裂解(PSD)串联质谱和高能量碰撞诱导解离 (CID)。
主要用途:
●结合磁珠即液体芯片用于从复杂体液发现潜在的生物标志物
●蛋白质样品分子量测定
●肽质量指纹图谱(Peptide Mass Fingerprinting, PMF)分析
●多肽序列测定
●蛋白质的磷酸化、糖基化等翻译后修饰分析
●寡核苷酸多态性分析
2. 液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱仪(micrOTOFQ II LC/MS QTOF)
micrOTOFQ II 属于四级杆-飞行时间串联质谱(Q-TOF MS)类质谱。其主要组成部分包括电喷雾离子漏斗源、四级杆、TOF质量分析器、注射泵和数据采集与处理部分。该质谱与液相色谱联用自动进样,适合于多肽的分离、检测与测序,可应用在大规模药物开发、蛋白质组学等新兴技术领域。
主要用途:
●蛋白质样品分子量测定
●精确质量测定及元素组成分析
●肽质量指纹谱
●多肽序列测定
●蛋白质的磷酸化、糖基化等翻译后修饰分析
●与二维液相相联,可进行多肽的分离、检测与测序
送样须知
蛋白样品鉴定:
1. 样品量:50pmol干粉或1ug/uL以上(一般测试)
100pmol干粉或1ug/uL以上(MALDI串联质谱分析)
2. 盐含量:挥发性无机盐<20mM,请勿使用PBS、SDS和尿素等质谱干扰物质;
3. 银染过程中不得使用戊二醛作为固定剂;
4. 电泳过程中,请操作者戴口罩、帽子、无粉手套,以防止角蛋白污染;
5. 送样时,请提供样品信息,包括样品名称、胶图、分子量大小、种属等。
生物标志物分析:
1. 适于分析各种体液(血液、尿液、胃液、前列腺液及乳头分泌液等)及蛋白提取液,蛋白提取液应统一进行蛋白定量。
2. 统一规范取样过程,血清样本的收集和保存方法如下:
(1)使用BD真空抽血管(不抗凝)清晨空腹抽血2-5ml,半小时内放入4℃冰箱保存,4℃3000转离心5分钟。取上清加入eppendorf管。再次3000转离心5分钟,0.5ml eppendorf管分装,20µl/管,放入-80℃保存,每个样本至少3管以上(以备重复检测)。
(2)血清样本在离体4小时内,应完成离心、分装等过程,并放入-80℃保存。期间所有操作均在4℃以下进行,所有样本保证只冻融一次。
注:样本不能有溶血,不能将下层的细胞吸入,不能吸入上层油脂;操作时不要戴有粉乳胶手套,以免滑石粉干扰对样品的检测。
3. 样本应标记清楚,材料齐全。
4. 实验耗材的统一 为保证样品的质量及条件的统一,对耗材要求如下:
Pipet Tips(Axygen公司)
Eppendorf 管 (Axygen公司)
BD真空抽血管(不抗凝)(BD公司)
5. 每周一至周五,请提前1-2周预约。