美国纽约大学朗格尼健康中心Syeda等报告的临床验证研究显示，在晚期黑色素瘤患者中，治疗前和治疗期间BRAF V600突变ctDNA检测可作为靶向治疗临床结局的独立预测生物标志物。(Lancet Oncol. 2021, 22: 370-380)

黑色素瘤缺乏有效的血液学生物标志物来监测和预测治疗效果。游离循环肿瘤DNA (ctDNA)是潜在的生物标志物。有多种检测方法都有探讨，然而到目前为止，尚无大样本研究探讨ctDNA的系统改变与BRAF、MEK或BRAF加MEK抑制剂治疗后患者生存之间的关系。该研究目的是评估基线ctDNA浓度和动力学是否可预测生存结果。

研究者开展了这项临床验证研究，使用分析验证的液滴数字PCR，对两项临床试验中≥18岁患者治疗前和治疗期间血浆样本BRAF V600突变ctDNA进行了检测分析。COMBI-d 研究(NCT01584648)是一项随机双盲Ⅲ期研究，探讨达拉非尼联合曲美替尼对比达拉非尼联合安慰剂在BRAF V600突变阳性、不可切除或转移性黑色素瘤患者的治疗效果。ECOG PS为0或1分。COMBI-MB研究 (NCT02039947)是一项开放标签、非随机、Ⅱ期研究，评估了达拉非尼联合曲美替尼治疗BRAF V600突变阳性转移性黑色素瘤和脑转移患者的疗效。COMBI-MB组A队列患者为无症状脑转移，既往无专门针对脑部病灶的局部治疗，ECOG PS为0或1分。

在这两项试验中，生物标志物分析都是预先设定的探索性终点，并在COMBI-d和COMBI-MB的意向治疗人群中进行。该分析研究了突变拷贝数(基线或第4周或零转换状态)和疗效终点(无进展生存期、总生存期和最佳总缓解)之间的关系。使用Cox模型、Kaplan-Meier和log-rank来分析治疗前ctDNA浓度与无进展生存(PFS)和总生存(OS)的关系。除突变拷贝数外，还分析了其他变量如乳酸脱氢酶的预后价值。

在COMBI-d研究中，423例患者中345例(82%)可获得治疗前血浆样本，224例(53%)可获得治疗期间(第4周)血浆样本。在COMBI-MB队列A中，76例颅内和颅外转移性黑色素瘤患者中有38例(50%)获得了治疗前和治疗期间的样本。在345例患者(COMBI-d)中320例(93%)以及38例患者(COMBI-MB)中34例(89%)的治疗前样本中检测到ctDNA。

在COMBI-d中，ctDNA浓度作为一个连续变量进行评估时，基线BRAF V600突变阳性ctDNA浓度升高与较差的OS相关(单因素分析，HR=1.13，95%CI 1.09~1.18，P<0.0001)，与治疗组和基线乳酸脱氢酶浓度无关(HR=1.08，95%CI 1.03~1.13，P=0.0020)。

以血浆ctDNA浓度界值为64个拷贝数/mL分层，可将COMBI-d研究中患者分为高危和低危的生存结局不同的亚群(PFS：HR=1.74，95%CI 1.37~2.21，P<0.0001;OS：HR=2.23，95%CI 1.73~2.87，P<0.0001)。这一结果在COMBI-MB队列中得到验证(PFS：HR=3.20，95%CI 1.39~7.34，P=0.0047;OS：HR=2.94，95%CI 1.18~7.32，P=0.016)。

在COMBI-d中，第4周无法检测到ctDNA与较长的无进展生存和总生存显著相关，尤其是在乳酸脱氢酶浓度升高的患者中(PFS：HR=1.99，95%CI 1.08~3.64，P=0.027;OS： HR=2.38，95%CI 1.24~4.54，P=0.0089)。

(编译 李淑华)