西班牙研究者Bruno Paiva等报告，循环肿瘤细胞(CTC)在多发性骨髓瘤(MM)患者预后和分子图谱分析中有新的作用，为将外周血标本(PB)中CTC检测整合进入流式-分子诊断流程提供了理论依据。(摘要号 23)

对MM患者骨髓(BM)中分离出的肿瘤细胞进行的大规模平行测序已经证实，MM存在显著的克隆异质性，每例患者存在的中位亚克隆数为5个。可以设想，MM中真实的克隆异质性将会更高，因为MM中BM浸润通常是灶性的，单一BM标本只是代表了整个BM成分的一小部分。因此，尚无研究尝试液体活检技术[例如，从患者外周血标本(PB)检测基因特征]是否可以帮助获得更完整的MM克隆多态性图谱。

另外，在治疗过程中BM活检不可能反复复查，也要求对MM患者开发一种创伤性较小的基因检测方法。为了确定在MM患者中非侵袭性地检测基因特征的整体实用性，明确CTC的突变图谱能否反应此类患者BM中浆细胞(PC)的克隆性，该研究使用多色流式细胞仪(MFC)对自PETHEMA/GEM2010MAS65研究中前瞻性入组50例新诊断有症状的MM患者，自Dana-Farber肿瘤研究入组64例缓解期/维持治疗期复发的患者，均进行了CTC计数。

全外显子测序方面，研究者获得了8例新诊断未治疗患者的骨髓、CTC和生殖系T淋巴细胞。BM克隆性PC和CTC的外显子测序倍数高达200倍，生殖系细胞为50倍。CTC进行全基因组扩增(WGA)，每份标本建两个独立的基因文库，随后对每个副本进行测序。对于WGA的标本，仅使用在两份平行文库中都存在单核苷酸多态性(SNV)。

结果显示：在研究CTC是否能够成为MM患者基因特征检测的、可靠的、非侵袭性手段之前，首先确定了它在不同疾病状态的可行性。高敏MFC技术显示，在40/50例(80%)新诊断的MM患者和71/130例(55%)复发或缓解期的患者中，多重测序检出了CTC。

在CTC计数的预后价值方面，这40例PB CTC阳性的新诊断患者中有19例复发，中位进展时间为31个月;而另外10例没有检出CTC的患者中仅有1例复发，中位进展时间未达到(P=0.08)。随后，对复发或缓解期患者进行多次PB CTC的动态变化与预测预后关系的研究中发现，CTC计数增加和预后不良相关(P=0.01)，提示CTC的绝对量和变化趋势对MM的预后都有意义。

在证实了CTC能够在大部分MM患者中被稳定检出后，紧接着开展CTC的突变图谱研究，并将其与该患者配对的BM克隆性PB对比。在同一例患者的BM和CTC中可分别检出223项(中位值)SNV和118项(中位值)SNV。在配对BM和CTC中，发现体细胞多态性的一致性为79%。

值得一提的是，在检测MM中常见特异突变(如KRAS、NRAS、BRAF等)时，13个基因总计存在18个非同义SNV(NS-SNV)，大部分NS-SNV能够在同一患者的配对BM PC和CTC中同步检出。不仅如此，研究还发现了若干个仅发生在CTC或BM克隆性PC中的独特突变。其中，39个NS-SNV为CTC特异性的，多例患者的CTC中均可检出4个基因(CR1、DPY19L2、TMPRSS13和HBG1)的6个NS-SNV。配对BM和PB肿瘤细胞与拷贝数量多样性(CNV)模式存在显著的相关性。

(编译 王维达 审校 王亮 吕跃)

中山大学附属肿瘤医院 吕跃教授述评：

大家都知道，MM中BM浸润通常是灶性的，单一BM标本只是代表了整个BM成分的一小部分，仍然存在缺欠，尽管采取了多部位穿刺等的许多措施，但是如何真正解决仍然是个头痛的问题。因此，是否使用液体活检技术[例如，从患者外周血标本(PB)检测基因特征]能够帮助获得更完整的MM克隆多态性图谱是一个方向。本研究研究确定了CTC在MM患者预后和分子图谱分析中的新作用，是一个很好的开端。